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HPLC概念
发布时间:2010-10-18   点击次数:2599次

== 色谱理论 ==

色谱法的分离原理:溶于流动相( phase)中的各组分经过固定相时,由于与固定相(stationary phase)之间的相互作用(吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和)的大小、强弱不同,样品各组分在固定相与流动相中的溶解各不相同,从而经过固定相时的滞留时间不同,先后从固定相中流出时间各不相同。
    液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相,称为经典液相色谱法,此方法柱效低、时间长(常有几个小时)。液相色谱法(High performance Liquid Chromatography,HPLC)是在经典液相色谱法的基础上,于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀,小颗粒具有高柱效,但会引起高阻力,需用高压输送流动相,故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chrmatography,HPLC)。又因分析速度快而称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chrmatography ,HSLP)。也称现代液相色谱。

 

 

    == 色谱常用术语 ==
·色谱图(Chrmatography)——样品流经色谱柱和检测器,所得到的信号-时间曲线,又称色谱流出曲线(elution profile)。
·基线(base line)——经流动相冲洗,柱与流动相达到平衡后,检测器测出一段时间的流出曲线。一般应平行于时间轴。
·噪音(noise)——基线信号的波动。不正常的噪音通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。
·漂移(drift)——一段时间内基线随时间的缓缓变化。
·色谱峰(peak)——组分流经检测器时响应的连续信号产生的曲线。或色谱曲线上的突起部分。
·拖尾因子(tailing factor,T)——用以衡量色谱峰的对称性。也称为对称因子(symmetry factor)或不对称因子(symmetry factor)。

T=W0.05h\\2d1

W0.05h:0.05峰高处的峰宽

d1:峰极大到峰前沿之间的距离

·峰底——基线上峰的起点至终点的连线。
·峰高(peak height,h)——峰的zui高点至峰底的距离。
·峰宽(peak width,W)——峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点间的距离。W=4σ
·半峰宽(peak width at half-height,Wh/2)——峰高一半处的峰宽。Wh/2=2.355σ
·标准偏差(standard deviation,σ)——正态分布曲线x=±1时(拐点)的峰宽之半。正常峰的拐点在峰高的0.607倍处。标准偏差的大小说明组分在流出色谱柱过程中的分散程度。σ小,分散程度小、极点浓度高、峰形瘦、柱效高;反之,σ大,峰形胖、柱效低。
·峰面积(peak area,A)——峰与峰底所包围的面积。A=2.507 σ h=1.064 Wh/2 h
·死时间(dead time,t0)——不保留组分的保留时间。
·死体积(dead time,V0)——由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所占据的空间。它包括4部分:进样器至色谱柱管路体积、柱内固定相颗粒间隙(被流动相占据,Vm)、柱出口管路体积、检测器流动池体积。其中只有Vm参与色谱平衡过程,其它3部分只起峰扩展作用。为防止峰扩展,这3部分体积应尽量减小。V0=F×t0(F为流速)
·保留时间(retention time,tR)——从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。
·保留体积(retention volume,VR)——从进样开始到某组分在柱后出现浓度极大值时流出溶剂的体积。VR=F×tR
·调整保留时间(adjusted retention time,t'R)——扣除死时间后的保留时间。t'R=tR-t0
·调整保留体积(adjusted retention volume,V'R)——扣除死体积后的保留体积。V'R=VR-V0或=F×t'R
·理论塔板数(theoretical plate number,N)——用于定量表示色谱柱的分离效率(简称柱效)。
·理论塔板高度(theoretical plate height,H)——每单位柱长的塔板数。
·分配系数(distribution coefficient,K)——在一定温度下,化合物在两相间达到分配平衡时,在固定相与流动相中浓度之比。

K= CS/CM

CS:为组分在固定相中的浓度

CM:为组分在流动相中的浓度

·容量因子(capacity factor,k')——化合物在两相间达到分配平衡时,在固定相与流动相中的量之比。
·选择性(selectivity factor,α)——相邻两组分的分配系数或容量因子之比。
·分离度(resolution,R)——相邻两峰的保留时间之差与平均峰宽的比值。也叫分辨率,表示相邻两峰的分离程度。

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