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waters液相色谱仪测定大豆胚轴中单糖链大豆皂甙的含量
发布时间:2012-09-26   点击次数:3479次

  一、waters液相色谱仪和试剂
检测单元为Waters液相色谱仪是非常灵活的HPLC系统,包WatersTM 717 plus自动进样器;Waters 600E控 制单元;WatersTM 805数据 处理机和 Waters 2410差示折光仪。液相色谱用试剂为色谱纯。
二、色谱条件
色谱柱为 ODS-AM一303柱 (YMC,4.6 mm×250 mm,5肚m),柱温 40℃,流动相为含 0.1  三氟已酸的乙腈 一水 (40:60,v/v),流速1 mL rain~,高纯氦气脱气 ,进样量 10 L,分析时间为 45 rain。
三、标样配制
大豆皂甙标准品,实验室自行制备,通过 IR、FAS-MS、 H—NMR和”C_NMR鉴定 ,液相色谱分析为单一峰。称取Ba和Bb、Bd和Be、ag和Dg标准品 ,加甲醇溶解定容至 10 mL,分别配成浓度为0.561和 0.588、0.396和 0.503、0.344和 0.406 mg
mL叫的溶液,作为对照品溶液。分别吸取标准品液10 L,供 HPLC分析。
四、试样制备
大豆冷冻干燥后剥离胚轴 。将 3 kg大豆胚轴研磨粉碎 ,用15 L 50甲醇常温提取 ,提取液经喷雾干燥得粗粉 562 g。将粗粉用等体积正丁醇一水溶液萃取,取正丁醇层,经减压蒸馏、冷冻干燥,得总糖甙 223 g。
五、测定
称取总糖甙 0.1 g,用甲醇定容至50 mL,以Milipore FH  0.5肚m过滤膜过滤后作为样品供试液。分别吸取供试液 1O L,供 HPLC分析。
六、结论
建立了大豆胚轴中单糖链大豆皂甙的液相色谱测定方法。采用差示折光检测法,结果峰面积值和进样量之间呈良好的线性关系 ,用于单糖链大豆皂甙的分析中优于紫外检测法。所建立的检测方法灵敏度、重现性均能满足一般分析要求 ,可用于大豆皂甙样品中其它大豆皂甙的分析中。

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